CAR-T疗法是一种治疗肿瘤的新型精准靶向疗法,利用基因工程技术体外修饰患者的T细胞,创建高效的癌症靶向机制,达到细胞治疗的目的。该方法已被许多临床实验证明能够有效的缓解急性淋巴细胞白血病和大B细胞淋巴瘤患者的病情。采用过继细胞疗法对T细胞、NK细胞、巨噬细胞、树突状细胞和其它常见的免疫细胞亚型进行工程设计并递送目的基因时,无论是递送嵌合抗原受体(CAR)还是其他不同的转基因,以往的方式通常都会面临许多的困难或不足。例如目前主要使用的T细胞修饰法为病毒载体转导,是将病毒整合到宿主细胞的基因组中(具有持续时间长的特点);这种方法可能会导致严重的不良影响,因此,有必要探索一种更好的基因递送方式。为了解决这些难点,BOB体育半岛下载提供了新的基因递送解决方案。
近些年mRNA技术的飞速发展,使得信使RNA(mRNA)被用来作为一种在免疫细胞中产生瞬时基因表达的新兴策略。该方法有效避免了使用病毒载体带来的不利影响,因此被广泛使用,这其中也包括了在CAR治疗领域的应用。过去人们通常使用电穿孔的方式来递送mRNA,但这种递送方式可能具有细胞毒性。脂质纳米颗粒(LNPs)近年来被用来作为mRNA递送的方式,已在制药工业中作为载体递送了许多种治剂。mRNA-LNP递送系统被设计用于将mRNA体外递送至人体免疫细胞亚型,该系统可以针对不同的使用情况产生多种不同的方案,以获得最高的效率。
湖南BOB体育半岛下载技术有限公司打造了一个综合平台,用于推进免疫细胞治疗工程的研究应用,致力于在免疫细胞治疗领域中将新的基因引入到人体的自然防御力中。本公司的mRNA-LNP基因递送定制服务为许多不同的细胞类型提供了一个完全验证的mRNA递送或mRNA-LNP递送系统,以诱导功能性蛋白表达,探索基于mRNA和LNP的基因治疗潜力。
mRNA-LNP基因递送技术和服务平台
图1 采用mRNA-LNP的免疫细胞治疗示意图。
服务实施阶段和报价
有效的瞬时基因表达
使用mRNA脂质体递送平台能够在许多不同的细胞类型(HEK293、T细胞、NK细胞、树突状细胞、巨噬细胞、干细胞等)中递送瞬时基因表达。瞬时基因表达允许短期的基因表达被递送到靶位点,并且在递送机制完成其任务后被身体移除。例如:
a、 mRNA编码非突变的肿瘤抗原,以启动宿主免疫系统防御肿瘤细胞。
b、 候选的mRNA编码的细胞因子为患者的身体提供支持抗癌免疫应答的免疫激活/调节细胞因子。
图2 K562细胞转染GFP-脂质体。
用GFP+mRNA-脂质体转染前(a)后(b)K562细胞的荧光成像。
图3. 用GFP-LNP转染HEK293S并进行稳定性试验。
GFP-脂质体在HEK293S细胞中的表达及其稳定性。经BOB体育半岛下载公司脂质纳米颗粒递送的用BOB体育半岛下载mRNA转染的HEK293S细胞的冻融循环。1个解冻循环后和-80°C条件下保存24小时后的流式细胞术检测结果
图4. GFP+mRNA-LNP在T细胞中的递送和表达。
图5. CAR+mRNA-LNP在NK细胞中的递送和表达。
图6. CAR+mRNA-LNP在T细胞中的递送和表达。
BOB体育半岛下载mRNA-LNP与嵌合抗原受体(CAR)mRNA产生CAR-T细胞。左图:未转染的T细胞对照。中间:小鼠Fab-APC的T细胞+LNP-CAR。右图:T细胞+LNP-CAR,采用小鼠Fab-FITC检测。
嵌合抗原受体T细胞和NK细胞工程可以很容易地用mRNA-LNP生产。CD19、BCMA、CD37、双特异性CAR和其他靶肿瘤抗原CAR-T/NK可用于CAR验证或用于成功治疗复发癌症患者。
CAR-T/NK平台的10个应用方向
● CAR-T平台
● 抗体筛选
● 杂交瘤测序
● 慢病毒生产
● mRNA转染
● CAR-T细胞生产
● RTCA和细胞因子测定
● 亲和力调节和人源化
● 动物研究
● CAR-T/CAR-NK细胞扩增和优化
图7. 加入LNP后24小时,用BCMA CAR mRNA LNP(PM-LNP-0017)产生CAR-T细胞。
左图:实时细胞杀伤性试验(RTCA)测定的BCMA CAR-T细胞毒性。右图:ELISA实验检测细胞因子IFN-γ分泌